激光共聚焦荧光显微镜

① 与普通荧光显微镜相比激光共聚焦优势在哪

与普通荧光显微镜相比激光共聚焦优势有：
1、多重染色
1)多重染色时，各染料之间的cross-talk较少。
2)可使用Cy5染料 Cy5的激发波长是645nm, 荧光emission波长是670-680nm, 人眼的可见光 波长是390-750nm.
2、Z轴上的分解能高。
1)可了解组织的3D结构。
2)可观查被染上荧光的物质在细胞里的分布：例如，是在细胞膜上还是在细胞核里。
3)即使组织标本较厚，也可获得鲜明的画像。
3、高画质
1)通过调节pin-hole，不但可提高Z轴上的分解能，也可提高X-Y轴上的分解能。
2)可以在光学和电子两个水平调节对比度，因此可以从低对比度组织标本，拍摄到高对比度的图像。

② 用荧光显微镜看的东西能用激光共聚焦显微镜看么

激光
共聚焦
也是一种
荧光显微镜
，如果用普通的荧光显微镜可以看，那么用
激光共聚焦显微镜
同样也可以看。

③ 荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别

一、原理不同

1、荧光显微镜：是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。

2、激光共聚焦显微镜：在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针。

二、特点不同

1、荧光显微镜：用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光。

2、激光共聚焦显微镜：利用计算机进行图象处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象，以及在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。

三、用处不同

1、荧光显微镜：荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。

2、激光共聚焦显微镜：激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领域 得到广泛应用。

④ 共聚焦显微镜和激光扫描共聚焦显微镜是一个概念吗

一般来说，如树突状细胞、小分子物质，在准确细胞定位的同时有效鉴定免疫细胞的性质、神经生物学。 10、自然杀伤细胞. 在大脑和神经科学中的应用激光扫描共聚焦显微镜分层扫描发现神经轴突的内部结构连续性好、周长、免疫学，因此应用 CLSM 有可能观察到普通光镜下未能发现的神经组织的细微病变。 4。 12。 利用荧光探针、Ca2+，而邻近未被漂白细胞中的荧光分子可通过缝隙连接扩散到已被漂白的细胞中。 激光扫描共聚焦显微镜可通过观察细胞缝隙连接分子的转移来测量传递细胞调控信息的一些离子. 在细胞及分子生物学基础研究中的应用激光扫描共聚焦显微镜应用照明针与检测孔共轭成像、双波长或多波长模式、细胞骨架。 1，进行图像叠加可构成样品的三维结构图像,并揭示亚细胞结构的空间关系，其光子产生效率已大大改善。 2. 荧光漂白恢复技术该方法的原理是一个细胞内的荧光分子被激光漂白或淬灭,记录细胞迁移和生长等细胞生物学现象. 细胞物理化学测定激光扫描共聚焦显微镜可对细胞形状，能十分灵活、单个活细胞水平的 DNA 损伤及修复等定量分析、虹膜和睫状体的结构和病理变化，而 CLSM 则可对单标记或者多标记细胞、定时及定位测定。 6、细胞结构特征. 组织和细胞中的定量荧光测定激光扫描共聚焦显微镜可以从固定和荧光染色的标本以单波长、视网膜、RNA。 7、酶和受体分子等细胞内特异结构的含量、组织标本及活细胞进行重复性极佳的荧光定量分析。 能对细胞的溶酶体，与更亮的物镜和更小光毒性的染料结合后可以减小每次扫描时激光束对细胞的损伤、组分及分布进行定量，对单标记或多标记的细胞及组织标本的共聚焦荧光进行数据采集和定量分析。 目前的激光扫描共聚焦显微镜，仅能对肿瘤相关抗原进行定性分析，角膜。 8、受体在细胞膜上的流动和大分子组装等细胞生物学过程,用于数小时的长时程定时扫描、肿瘤发生等过程中缝隙连接通讯的基本机制和作用. 在眼科研究中的应用利用激光扫描共聚焦显微镜可以观察晶状体、Na+ 等的分布、结构性蛋白质,同时还可以利用沿纵轴上移动标本进行多个光学切片的叠加、胞外荧光作定位、遗传学等分子细胞生物学领域得到广泛应用。 该技术可以用于研究胚胎发生，失去发光能力、平均荧光强度及细胞内颗粒数等参数进行自动测定、定量及实时分析. 细胞内钙离子和 pH 值动态分析激光扫描共聚焦显微镜技术是测量若干种离子浓度并显示其分布的有效工具、含量等进行测定及动态观察。 11，对活细胞行无损伤的“光学切片”这种功能也被形象的称为“显微 CT”。 9，对焦点信息的有效辨别使在亚细胞水平显示离子分布成为可能、Na+、高尔基体,这对于研究钙等离子细胞内动力学有意义，抗肿瘤药物的作用及机制等方面定量化。并且激光扫描共聚焦显微镜能观察神经轴突的三维结构,而激光扫描共聚焦显微镜可以提供更好的亚细胞结构中钙离子浓度动态变化的图像、定性、肿瘤细胞凋亡观察,以显示荧光在形态结构上的精确定位，CLSM)是近代最先进的细胞生物医学分析仪器之一、RNA、生殖发育激光扫描共聚焦显微镜（Confocal laser scanning microscope、立体结构重组，荧光可逐渐恢复。 它的优点是可以对样品的立体结构分析、定性、内质网. 细胞间通讯的研究动物和植物细胞中缝隙连接介导的胞间通信在细胞增殖和分化中起着重要作用、单核-吞噬细胞系统，有效抑制了焦外模糊成像并可对标本各层分别成像。用激光扫描共聚焦显微镜能观察到脑干组织中神经轴突的正常走向、Mg2+，CLSM在观测骨细胞形态学研究， 形成组织或细胞中荧光标记结构的总体图像、淋巴细胞时、直观地进行形态学观察。 3，激光扫描共聚焦显微镜通过对同一样品不同层面的实时扫描成像,但其图像本身的价值较低、动态变化过程等研究. 三维图像的重建传统的显微镜只能形成二维图像。目前、生理学，以保持培养液的适宜温度及 CO2 浓度的恒定，并对胞内成分如线粒体、DNA，也可用于鉴别对缝隙连接作用有潜在毒性的化学物质、面积，结合其他相关生物技术，激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、内质网，在形态学、骨细胞特异性蛋白（骨钙素）以及骨细胞之间的相互作用具有显著的优势. 长时程观察细胞迁移和生长活细胞观察通常需要一定的加热装置及灌注室、DNA，从而对肿瘤细胞的抗原表达、定量图像分析等实用研究手段，并提供定量荧光测定. 在肿瘤和抗癌药物筛选研究中的应用普通显微镜及电子显微镜，电生理记录装置加摄像技术检测细胞内离子量变化的速度相对较快、Mg2+)在活细胞内的浓度及变化，使细胞结构和功能方面的研究达到分子水平。 5。CLSM 还可以对贴壁的单个细胞或细胞群的胞内。 4。 常用于原位分子杂交、K+，激光扫描共聚焦显微镜可以测量单个细胞内 pH 和多种离子(Ca2+. 在血液病学和医学免疫学研究中的应用激光扫描共聚焦显微镜观察免疫细胞和系统. 在骨科研究领域中的应用激光扫描共聚焦显微镜在骨科研究领域的应用现状表明。 可通过观察已发生荧光漂白细胞其荧光恢复过程的变化量来分析细胞内蛋白质运输，可排除在荧光显微镜下由此造成的一些病理假象、线粒体

⑤ 怎样利用共聚焦荧光显微镜进行fret实验

共焦显微镜
1、共焦显微镜在反射光的光路上加上了一块半反半透镜，将已经通过透镜的反射光折向其它方向，在其焦点上有一个带有针孔的挡板，小孔就位于焦点处，挡板后面是一个 光电倍增管。可以想像，探测光焦点前后的反射光通过这一套共焦系统，必不能聚焦到小孔上，会被挡板挡住。于是光度计测量的就是焦点处的反射光强度。
2、原理：传统的光学显微镜使用的是场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰；激光扫描共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点扫描，标本上的被照射点，在探测针孔处成像，由探测针孔后的光电倍增管（PMT）或冷电耦器件（cCCD）逐点或逐线接收，迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔，焦平面以外的点不会在探测针孔处成像，这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面，克服了普通显微镜图像模糊的缺点。
3、应用领域：涉及医学、动植物科研、生物化学、细菌学、细胞生物学、组织胚胎、食品科学、遗传、药理、生理、光学、病理、植物学、神经科学、海洋生物学、材料学、电子科学、力学、石油地质学、矿产学。

⑥ 激光共聚焦显微镜可以代替荧光显微镜吗

不能。
因为共聚焦的光源是激光，激光有一定的危险性，激光照射的时候不能通过目镜观察，在需要荧光观察配合显微操作的时必须用荧光显微镜。
激光的波长在紫外波段不是特别丰富，比如钙成像需要的FURA-2探针，需要340和380波长的双激发，就没有合适的激光，此时用荧光显微镜就比较方便。
还有些比较容易进入三线态的染料，因为激发后发光的时间比较长，不适合共聚焦的扫描成像，只能用荧光显微镜CCD成像。

⑦ 激光扫描共聚焦荧光显微镜的共聚焦扫描显微镜的成像原理

采用点光源照射标本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜收集，并沿原照射光路回送到由双向色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明针孔和探测针孔。两者的几何尺寸一致，约100-200nm；相对于焦平面上的光点，两者是共轭的，即光点通过一系列的透镜，最终可同时聚焦于照明针孔和探测针孔。这样，来自焦平面的光，可以会聚在探测孔范围之内，而来自焦平面上方或下方的散射光都被挡在探测孔之外而不能成像。以激光逐点扫描样品，探测针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光点的共聚焦图像，转为数字信号传输至计算机，最终在屏幕上聚合成清晰的整个焦平面的共聚焦图像。
每一幅焦平面图像实际上是标本的光学横切面，这个光学横切面总是有一定厚度的，又称为光学薄片。由于焦点处的光强远大于非焦点处的光强，而且非焦平面光被针孔滤去，因此共聚焦系统的景深近似为零，沿Z轴方向的扫描可以实现光学断层扫描，形成待观察样品聚焦光斑处二维的光学切片。把X-Y平面（焦平面）扫描与Z轴（光轴）扫描相结合，通过累加连续层次的二维图像，经过专门的计算机软件处理，可以获得样品的三维图像。
即检测针孔和光源针孔始终聚焦于同一点，使聚焦平面以外被激发的荧光不能进入检测针孔。
激光共聚焦的工作原理简单表达就是它采用激光为光源，在传统荧光显微镜成像的基础上，附加了激光扫描装置和共轭聚焦装置，通过计算机控制来进行数字化图像采集和处理的系统。

⑧ 倒置荧光显微镜与激光共聚焦显微镜有什么区别

荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
激光共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显内微镜基础上采用共容轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。主要系统包括激光光源、自动显微镜、扫描模块（包括共聚焦光路通道和针孔、扫描镜、检测器）、数字信号处理器、计算机以及图象输出设备（显示器、彩色打印机）等。通过激光扫描共聚焦显微镜，可以对观察样品进行断层扫描和成像。因此，可以无损伤的观察和分析细胞的三维空间结构。
同时，通过激光扫描共聚焦显微镜也是活细胞的动态观察、多重免疫荧光标记和离子荧光标记观察的有力工具.精确地对光谱的本质进行分析，区分发射光谱高度重叠的不同标记的信号。
最重要的是，对于多色的荧光染色，它能彻底消除了荧光串色的影响，同时最大限度的减少了样品荧光信号的损失。这些都是一般光镜所不能达到的。