ta克隆怎么排除协同感染

Ⅰ TA克隆的具体原理及方法求教。~~~~~

ta克隆方法（original
ta
cloning
kit）把pcr片断与一个具有3-t突出的载体dna连接起来的方法。因为pcr反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3加上a。例如：taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，pcr反应时在每条pcr扩增产物的3端自动添加一个3-a突出端。只有用经过特殊处理的具有3-t突出末端的dna片断才能通过t/a配对进行连接。通过pcr的方法扩增目的基因片断的过程中，由于往往不清楚目的基因的dna序列，获得的目的片断通常需要通过ta克隆的方法，重组到t-载体中，通过序列测定清楚dna序列。由于在pcr过程中，使用的dna聚合酶不同，往往分为2种情况：（1）使用不同的taq酶，在pcr扩增循环结束后，加上72℃
10分钟一个过程，taq酶可以在扩增产物的3末端加上a，因此pcr产物回收纯化后可以和t载体直接连接。（2）使用高保真的dna聚合酶，如pfu酶，由于其不能在扩增产物的3末端加上a，得到的dna序列为钝端，因此，需要在回收纯化后进行加a的过程，通常是以pcr回收产物为模板，加上一定量的普通taq酶和反应液，加入datp（或dntp），
72℃
10分钟，然后将加a产物直接用于ta连接。

Ⅱ ta克隆的优缺点

一、缺点：

1、PCR产物的酶切和判断比较困难。

2、另外酶切连接过程本身也相当地费时费力。

二、优点：

1、克隆PCR产物较简便、快捷的方法。

2、不需使用含限制酶序列的引物，不需将 PCR 产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理，不需在 PCR 扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。

(2)ta克隆怎么排除协同感染扩展阅读：

T-A克隆由于在PCR过程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分为2种情况：

1、使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由于其不能在扩增产物的3末端加上A，得到的DNA序列为钝端，因此，需要在回收纯化后进行加A的过程，通常是以PCR回收产物为模板，加上一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP（或dNTP）， 72℃ 10分钟，然后将加A产物直接用于TA连接。

2、使用不同的Taq酶，在PCR扩增循环结束后，加上72℃ 10分钟一个过程，Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A，因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。