真菌去壁

A. 溶菌酶能用于真菌的脱壁吗

没有作用！
溶菌酶可以破坏细菌细胞壁的肽聚糖，而真菌细胞壁主要成分是几丁质，所以溶菌酶对真菌无效

B. 真菌的细胞壁是什么成分

真菌包括三类:1.单细胞真菌(酵母菌) 2.丝状真菌(霉菌)3.大型子实体真菌(覃菌即食用菌）
酵母菌的细胞壁厚约25nm，结构似三明治——外层为甘露聚糖，内层为葡聚糖，中间为蛋白质分子。
对于霉菌在菌丝的顶端的延伸区和硬化区中，细胞的内层是几丁质，外层为蛋白质；在亚顶端部位，由内至外分别为几丁质层，蛋白质层，和葡聚糖蛋白网层；在成熟区由内至外相应地；为几丁质层，蛋白质层，和葡聚糖蛋白网层；最后就是隔膜区，它由菌丝内壁向内延伸而成的环片状构造。

C. 真菌细胞壁降解酶

真菌细胞壁由几丁质、纤维素、葡聚糖、甘露聚糖等多糖、蛋白质和类脂构成，木霉菌可以产生大量这类物质的降解酶类，直接破坏植物病原真菌的细胞壁，导致细胞死亡。所有关于溶壁酶调控和表达的研究都是在不同碳源（如几丁质、葡聚糖、GlcNAc、真菌细胞壁）条件下的液体培养基中进行的，在此条件下，诱导物能够诱导木霉产生水解真菌细胞壁的溶壁酶。与生防相关的真菌细胞壁降解酶主要有几丁质酶、纤维素酶、葡聚糖酶、蛋白酶等。

12.2.2.1 几丁质酶

几丁质酶在木霉重寄生病原菌过程中发挥重要的作用。Inbar等（1995）研究T.harzianum特异性几丁质酶在其寄生白绢病菌过程中的活性。首先，T.harzianum的102kDa 1，4-β-N-乙酰葡聚糖胺酶（CHIT102）被诱导，随着作用时间的推移，诱导量逐渐下降，随后长约73kDa的1，4-β-N-乙酰葡聚糖胺酶（CHIT73）诱导量逐渐上升。但白绢病菌在与T.harzianum共同培养前经过高压灭菌时，这种现象就不会出现，这说明引起这种现象的重要因素来自宿主。Hoell等（2005）研究指出，几丁质酶 CHIT30 是从T.atroviride P1发酵液中分离纯化得到的，属于糖苷水解酶18 家族，最适 pH 为4.5～5.0，在降解β-几丁质时，能产生大量的三聚体和四聚体，N-乙酰葡糖胺试验显示，有7个糖结合位点。

Harman等（1996b）利用双重培养试验，让木霉分别拮抗R.solani和S.rolfsii，这两种病原菌含有的几丁质是细胞壁的主要组成成分。本研究双重琼脂培养中木霉菌种比R.solani生长快，但无法超过S.rolfsii的生长速度；在有效拮抗R.solani的寄生作用中检测到三种内切几丁质酶：52kDa（CHIT52），42kDa（CHIT42）和33 k Da（CHIT33），一种外切N-乙酰葡糖胺酶（CHIT102）。相反，在无效拮抗S.rolfsii的重寄生作用中，只有两种外切 N-乙酰葡糖胺酶（CHIT102和CHIT73）的活性被检测到。上述结果证实了T.harzianum的几丁质酶系统并不是由简单的“开/关”机制控制，并不仅仅相对几丁质的出现和消失而做出反应（Lorito et al.，1993b，1994）。因此，认为T.harzianum几丁质酶的这种不同表达影响了真菌拮抗特异性宿主的所有拮抗活性，从而决定了宿主活性。

Carsolio等（1994）在T.harzianum IMI206040与R.solani直接对峙分析中研究42kDa内切几丁质酶（CHIT42）的表达模式，结果发现CHIT42在拮抗过程中受到强烈诱导表达；Lorito等（1996c）进一步研究发现，在几丁质存在或光照情况下，内切几丁质酶编码基因Ech42进行表达；Cortes等（1998）和Zeilinger等（1999）研究证明，当T.harzianum与R.solani共培养，菌丝发生物理接触前，编码内切几丁质酶基因Ech42和蛋白编码基因Prb1均被诱导表达，且通过一个可溶性传导因子——几丁寡糖激发相关基因进行调控。与之形成鲜明对照的是R.solani仅在菌丝生长阶段几丁质酶Chit33被诱导产生（De las Mercedes et al.，2001），而T.asperellum中的几丁质酶CHIT33，CHIT36等均在与寄主接触前被诱导表达（Viterbo et al.，2002）；T.atroviride中的几丁质酶基因Ech42在碳源缺乏的情况下通过一种BrlA类似的顺式作用元件进行调控表达（Brunner et al.，2003）。Mach等（1999）研究发现 2个主要的几丁质酶基因 Ech42和Nag1（编码CHIT73）分别通过不同的信号分子调控表达。Zeilinger等（1999）通过原位表达几丁质酶基因Ech42发现，Ech42在木霉与寄主接触前和重寄生过程中均有表达，且通过可溶性几丁寡糖激发。

12.2.2.2 纤维素酶

Zaldívar等（2001）报道一株T.aureoviride的突变株7-121 可以产生过量的胞外纤维素酶和β-葡萄糖苷酶（纤维二糖酶）。该突变株在液体和固体培养基中迅速生长，摇瓶培养时产生的内切葡聚糖酶、滤纸酶活和纤维二糖酶量比野生型菌株增加了2～4倍；纤维二糖酶的产量特别高（约5U/mL），适合降解废弃物纤维素；此外还表现出增强的真菌细胞壁降解酶活性。以上均表明，它是一个可用于生物防治的候选菌株。Santos-Villalobos等（2013）也报道 T.asperellum T8 a 所产的纤维素酶可以降解芒果炭疽病菌（C.gloeosporioides）的菌丝体，通过筛选发现 17种木霉菌株对 C.gloeosporioides ATCC MYA456表现出至少67%的生长抑制，3种菌株具有完全抑制作用，确定T.asperellum T8 a在体外和体内都能够抑制C.gloeosporioides ATCC MYA456和5种从瓦哈卡州芒果园分离的C.gloeosporioides菌株。

12.2.2.3 葡聚糖酶

Donzelli等指出，T.atroviride中的β-1，3-葡萄糖苷酶（1，3-β-glucosidase）编码基因的表达被葡萄糖抑制，而被昆布多糖（laminarin）和其他葡聚糖所诱导（Donzelli et al.，2001）。而来自T.harzianum的外切a-1，3 葡聚糖酶（exo-alpha-1，3-glucanase）被真菌细胞壁和高压蒸汽处理的菌丝所诱导产生（Ait-Lahsen et al.，2001）；a-1，3葡聚糖酶基因通过重寄生灰霉病菌而诱导表达（Sanz et al.，2005）。BGN16.3，一个来自T.harzianum的酸性β-1，6-葡聚糖酶被真菌细胞壁诱导产生，再次证明了水解酶作为生防作用机制的可能性（Montero et al.，2005）。Djonovic等（2006b）用同样的方法证明了β-1，6-葡聚糖酶基因在T.viride重寄生和拮抗P.ultimum的过程中发挥了作用。

12.2.2.4 蛋白酶

Flores等（1996）利用基因缺失或过表达方法研究 T.harzianum 碱性蛋白酶基因（pbrl）在T.harzianum和R.solani拮抗作用时的表达，发现重寄生过程中pbrl的mRNA水平增加。Olmedo-Monfil等（2002）指出，蛋白质编码基因prb1受蛋白水解物抑制，而被R.solani细胞壁和渗透压力诱导，其过表达能够提高 T.harzianum 防治 R.solani的能力（Flores et al.，1997）。Tvsp1 基因是编码 T.viride 体外分泌的丝氨酸蛋白酶基因，在T.viride对R.solani的拮抗作用试验中，Pozo等（2004）通过丝氨酸蛋白酶TVSP1的缺失或过表达证实：该蛋白酶的缺失或过表达能够显著降低或提高棉花立枯病的防效，其缺失对生长和发育没有不利影响，证明TVSP1在生防作用中扮演了重要角色。

D. 真菌是不是都有细胞壁

大多数真菌有细胞壁。

一 真菌的基本特征

1 真菌的营养体

除少数单细胞真菌外，绝大多数真菌是由多细胞菌丝构成的。菌丝是纤细的管状体，有的分隔，有的不分隔，组成一个菌体的全部菌丝称菌丝体。

大多数真菌有细胞壁。某些低等真菌的细胞壁成分为纤维素，高等真菌细胞壁的主要成分为几丁质。

E. 真菌到底有细胞壁吗

真菌细胞的基本构造有细胞壁、细胞膜、细胞核、内质网、线粒体等。
真菌细胞壁的主要成分是多糖，另有少量的蛋白质和脂类。

F. 所有真菌都有细胞壁吗

不是所有真菌都有细胞壁。真菌细胞壁是真菌特有的一种细胞结构。动物细胞不具有细胞壁，真菌细胞壁与植物细胞壁不同。

真菌细胞壁干重的80%由碳水化合物组成，如：几丁质、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、纤维素、半乳聚糖等。大约10%由蛋白质及糖蛋白构成，蛋白质包括负责细胞壁生长的酶、特定胞外酶和将多糖交联起来的结构蛋白。

此外，还有类脂、无机盐等小分子。不同的多糖链相互缠绕组成粗壮的链，这些链构成的网络系统嵌入在蛋白质及类脂和一些小分子多糖的基质中，这一结构使真菌细胞壁具有良好的机械硬度和强度。

(6)真菌去壁扩展阅读

真菌的形态多样，一般分为单细胞和多细胞，酵母菌属于单细胞，而霉菌和蕈菌（大型真菌）都属于多细胞的真菌，它们归属于不同的亚门。大型真菌是指能形成肉质或胶质的子实体或菌核，大多数属于担子菌亚门，少数属于子囊菌亚门。

常见的大型真菌有香菇、草菇、金针菇、双孢蘑菇、平菇、木耳、银耳、竹荪、羊肚菌等。它们既是一类重要的菌类蔬菜，又是食品和制药工业的重要资源。

真菌的细胞既不含叶绿体，也没有质体，是典型异养生物。它们从动物、植物的活体、死体和它们的排泄物，以及断枝、落叶和土壤腐殖质中、来吸收和分解其中的有机物，作为自己的营养。真菌的异养方式有寄生和腐生。

真菌常为丝状和多细胞的有机体，其营养体除大型菌外，分化很小。高等大型菌有定型的子实体。除少数例外，真菌都有明显的细胞壁，通常不能运动，以孢子的方式进行繁殖。

常见的真菌感染多为白色念珠菌、阴道纤毛菌、放线菌等。盐水涂片中注意寻找真菌孢子、菌丝或纤毛菌丛。

G. 真菌细菌有无细胞壁

真菌：

真菌细菌都有细胞壁。

真菌细胞的基本构造有细胞壁、细胞膜、细胞核、内质网、线粒体等。

真菌细胞壁的主要成分是多糖，另有少量的蛋白质和脂类。

许多研究发现，不同的真菌，其细胞壁所含多糖的种类也不同，在低等真菌中，以纤维素为主，酵母菌以葡聚糖为主，而高等陆生真菌则以几丁质为主。

细菌：

细菌基本结构是各种细菌都具有的结构，包括细菌的细胞壁、细胞膜、细胞质、核质。

细胞壁位于菌细胞的最外层，组成较复杂，主要成分是肽聚糖，并随细菌不同而异。

革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞壁的共有组分为肽聚糖，但各自有其特殊组分。

(7)真菌去壁扩展阅读

一、真菌的结构

如果从形态上观察各种真菌，可能有较大的差异，但是它们的细胞构造基本上是相同的。真菌细胞的基本构造有细胞壁、细胞膜、细胞核、内质网、线粒体等。

二、细菌的结构

细菌的结构分为基本结构和特殊结构。基本结构是各种细菌都具有的结构，包括细菌的细胞壁、细胞膜、细胞质、核质。某些细菌特有的结构称为特殊结构，包括细菌的荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞。

三、细菌的种类

1、按形状分为三类，球菌、杆菌和螺旋菌（包括弧菌、螺菌、螺杆菌）。

2、按细菌的生活方式分为两大类，自养菌和异养菌，其中异养菌包括腐生菌和寄生菌。

3、按细菌对氧气的需求可分为两大类，需氧（完全需氧和微需氧）和厌氧（不完全厌氧、有氧耐受和完全厌氧）细菌。

4、按细菌生存温度可分为三大类，喜冷、常温和喜高温。

H. 真菌细胞壁破碎方法

小的玻璃珠研磨破碎
消化细胞壁的酶，比如zymolyase.Invitrogen等biotech 公司都有卖的
www.zymoresearch.com/protocols/yeast/E1001&2n2-tox-5-25.pdf