真菌分离纯化
㈠ 请问我该怎么样分离真菌并且对之进行纯化阿
太专业了,查一查专业书籍吧
㈡ 植物病变部位的真菌提纯方法,请具体点,如组织分离的详细步骤,单孢分离的具体过程!
真菌营养生长阶段的结构称为营养体。绝大多数真菌的营养体都是可分枝的丝状体,回单根丝状体答称为菌丝(hypha)。许多菌丝在一起统称菌丝体(mycelium)。菌丝体在基质上生长的形态称为菌落(colony)。菌丝在显微镜下观察时呈管状,具有细胞壁和细胞质,无色或有色。菌丝可无限生长,但直径是有限的,一般为2—30微米,最大的可达100微米。低等真菌的菌丝没有隔膜(septum)称为无隔菌丝,而高等真菌的菌丝有 各种真菌
许多隔膜,称为有隔菌丝。此外,少数真菌的营养体不是丝状体。而是无细胞壁且形状可变的原质团(plasmodium)或具细胞壁的、卵圆形的单细胞。寄生在植物上的真菌往往以菌丝体在寄主的细胞间或穿过细胞扩展蔓延。
㈢ 真菌代谢产物的分离纯化
一、酶是微生物(真菌是其中的一种)的代谢产物。提出方法如下:
1、酶的分离纯化需了解细胞制酶的流程、分离方法、以及酶制剂的保存。
酶的种类繁多,性质各异,分离纯化方法不尽相同,即便是同一种酶,也因其来源不同、酶的用途不同,而使分离纯化的步骤不一样。工业上的用酶一般无须高度纯化,如用于洗涤用的蛋白酶,实际上只须经过简单的提取分离即可。而对于食品工业用酶,则需要经过适当的分离纯化,以确保安全卫生。对于医药用酶,特别是注射用酶及分析测试用酶,则须经过高度的纯化或制成晶体,而且绝对不能含有热源物质。酶的分离纯化步骤越复杂,酶的收率越低,材料和动力消耗越大,成本就越高,因而在 符合质量要求的前提下,应尽可能采用步骤简单、收率高、成本低的方法。由于酶很不稳定,在提取时容易变性失活,因而提取酶时应注意:
(1)温度 整个提纯操作应尽可能在低温下(0~4℃)进行,以防止蛋白水解酶对目的酶的破坏作用尤其是在有机溶剂或无机盐存在下更应注意。
(2)PH值 在提纯过程中一般采用缓冲液作为溶剂,防止过酸或过碱。对一特定的酶,溶剂PH值的选择应考虑酶的PH稳定性以及酶的溶解度。
(3)盐浓度 因为大多数蛋白质具有盐溶性质,所以在抽提过程中可选用合适浓度的盐溶液以促进蛋白质溶解;但要注意当盐浓度过高时,酶容易变性。
(4)搅拌 剧烈搅拌容易引起蛋白质变性,提纯中应避免剧烈搅拌和产生泡沫。
(5)酶液是微生物生长的良好培养基,在提纯过程中应尽可能防止微生物对酶的破坏。
2、酶的制备: 从微生物(包括真菌)细胞制备酶的流程一般包括破碎细胞、溶剂抽提、离心、过滤、浓缩、干燥这几个步骤,对某些纯度要求很高的酶则需经几种方法乃至多次反复处理。
(1)破碎细胞 除了胞外酶的提取以外,所有胞内酶均需将细胞壁破碎后方可进一步抽提。破碎细胞有许多方法,动植物细胞常用高速组织捣碎机和组织匀浆器破碎,而微生物细胞的破碎则有机械破碎法、酶法、化学试剂法和物理破碎法等多种。
(2)溶剂抽提 大多数酶蛋白都可用稀酸、稀碱或稀盐溶液浸泡抽提,选用何种溶剂和抽提条件视酶的溶解性和稳定性而定,抽提时应注意溶剂种类、溶剂量、溶剂PH值等的选择。
(3)离心分离 离心分离是酶分离提纯中最常用的方法,主要用于除去发酵液中的菌体残渣或抽提过程中生成的沉淀物。工业上常用板框压滤机来完成酶的粗分离。
(4)浓缩 由于发酵液或酶抽提液中酶的浓度一般都比较低,必须经过进一步纯化以便于保存、运输和应用。事实上,大多数纯化酶的操作如吸附。沉淀、凝胶过滤等均包含了酶的浓缩作用,工业L常采用真空薄膜浓缩法以保证酶在浓缩过程中基本不失活。
(5)干燥 酶溶液或含水量高的酶制剂即使在低温下也极不稳定,只能作短期保存。为便于酶制剂的长时间的运输、储存,防止酶变性,往往需对酶进行于燥,制成含水量较低的制品。常用的干燥方法有真空干燥、冷冻干燥。喷雾干燥等。
二、一种真菌酶的具体分离纯化法:
根霉淀粉酶的分离纯化及部分性质研究
http://www.shm.com.cn (2006-08-30 11:02:40)
www.shm.com.cn/shzb/2006-08/30/content_18 ... 17K 2006-8-30 - 网络快照
㈣ 做真菌分离纯化,到培养基时,发现平板会有很多水汽,非常影响观察。 又没有哪位大神有解决方案啊
有,复你倒平板的时候别一个制一个分开倒,你摞起来一摞,从最底下那个开始往上一个一个倒……实验室应该有人会这样, 一点儿也不难做
这样,只有最上面那个板子是有冷凝水的了。
也可以分好几摞,倒完后小心地把他们摞起来成高高一摞,这样只有第一个有冷凝水。
在板子冷却至室温之前就不要动他们了,冷却到室温后分开,放4度去,倒着放。如果你的菌菌不怕培养基表面干,你也可以等板凝固以后尽快在超净台内打开盖子,大风吹它半小时,不过我不推荐吹板子。
培养的时候千万别倒过来,真菌是要正面培养的啊~~培养的时候别封封口膜,应该不会有太多哈气了。接种前,空白培养基先在温箱里倒着预热俩小时左右更好!!
㈤ 真菌污染细菌怎样纯化
这样你基本上就可以重新做了 吧 纯化也怕不好了
㈥ 细菌、真菌、病毒如何分离纯化
真菌是人眼可见的,比如说蘑菇(包括毒蘑菇)、灵芝等
细菌和病毒是人眼看不见的,得用显微镜看才能见得。
细菌与病毒最大区别是细菌有细胞核,病毒没有
㈦ 将土壤中的微生物(细菌,真菌,放线菌)进行分离,纯化,培养保藏的具体步骤及注意事项
1.用三种培养基培养,分别是牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养、分离)、马铃薯葡萄糖培专养基(属真菌培养),高氏1号培养基(放线菌)
2.培养一定时间,待菌长出,根据三种菌的菌落特点,选取菌种,用划线法接种到各种菌对应的斜面培养基上,培养。
3.进行生化实验,确定是否是你猜想的菌。三种菌的生化实验具体我也不是很清楚。
如果觉得还满意,请采纳。谢谢!
㈧ 如何进一步分离纯化所需的真菌
稀释平板法。挑单菌落接种。一般都比较纯。
㈨ 微生物学实验:土壤中的真菌,分离纯化后菌落是一圈圈的,请问这是那种菌
一般看形态鉴定不准确,提个DNA测序就知道了