激光共聚焦熒光顯微鏡

① 與普通熒光顯微鏡相比激光共聚焦優勢在哪

與普通熒光顯微鏡相比激光共聚焦優勢有：
1、多重染色
1)多重染色時，各染料之間的cross-talk較少。
2)可使用Cy5染料 Cy5的激發波長是645nm, 熒光emission波長是670-680nm, 人眼的可見光 波長是390-750nm.
2、Z軸上的分解能高。
1)可了解組織的3D結構。
2)可觀查被染上熒光的物質在細胞里的分布：例如，是在細胞膜上還是在細胞核里。
3)即使組織標本較厚，也可獲得鮮明的畫像。
3、高畫質
1)通過調節pin-hole，不但可提高Z軸上的分解能，也可提高X-Y軸上的分解能。
2)可以在光學和電子兩個水平調節對比度，因此可以從低對比度組織標本，拍攝到高對比度的圖像。

② 用熒光顯微鏡看的東西能用激光共聚焦顯微鏡看么

激光
共聚焦
也是一種
熒光顯微鏡
，如果用普通的熒光顯微鏡可以看，那麼用
激光共聚焦顯微鏡
同樣也可以看。

③ 熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡的區別

一、原理不同

1、熒光顯微鏡：是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體， 使之發出熒光， 然後在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。

2、激光共聚焦顯微鏡：在熒光顯微鏡成象的基礎上加裝激光掃描裝置，使用紫外光或可見光激發熒光探針。

二、特點不同

1、熒光顯微鏡：用於研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。 細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射後可發熒光；另有一些物質本身雖不能發熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色後，經紫外線照射亦可發熒光。

2、激光共聚焦顯微鏡：利用計算機進行圖象處理，從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖象，以及在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號及細胞形態的變化。

三、用處不同

1、熒光顯微鏡：熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具。它是由光源、濾板系統和光學系統等主要部件組成。是利用一定波長的光激發標本發射熒光，通過物鏡和目鏡系統放大以觀察標本的熒光圖像。

2、激光共聚焦顯微鏡：激光掃描共聚焦顯微技術已用於細胞形態定位、立體結構重組、動態變化過程等研究，並提供定量熒光測定、定量圖像分析等實用研究手段，結合其他相關生物技術，在形態學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域 得到廣泛應用。

④ 共聚焦顯微鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡是一個概念嗎

一般來說，如樹突狀細胞、小分子物質，在准確細胞定位的同時有效鑒定免疫細胞的性質、神經生物學。 10、自然殺傷細胞. 在大腦和神經科學中的應用激光掃描共聚焦顯微鏡分層掃描發現神經軸突的內部結構連續性好、周長、免疫學，因此應用 CLSM 有可能觀察到普通光鏡下未能發現的神經組織的細微病變。 4。 12。 利用熒光探針、Ca2+，而鄰近未被漂白細胞中的熒光分子可通過縫隙連接擴散到已被漂白的細胞中。 激光掃描共聚焦顯微鏡可通過觀察細胞縫隙連接分子的轉移來測量傳遞細胞調控信息的一些離子. 在細胞及分子生物學基礎研究中的應用激光掃描共聚焦顯微鏡應用照明針與檢測孔共軛成像、雙波長或多波長模式、細胞骨架。 1，進行圖像疊加可構成樣品的三維結構圖像,並揭示亞細胞結構的空間關系，其光子產生效率已大大改善。 2. 熒光漂白恢復技術該方法的原理是一個細胞內的熒光分子被激光漂白或淬滅,記錄細胞遷移和生長等細胞生物學現象. 細胞物理化學測定激光掃描共聚焦顯微鏡可對細胞形狀，能十分靈活、單個活細胞水平的 DNA 損傷及修復等定量分析、虹膜和睫狀體的結構和病理變化，而 CLSM 則可對單標記或者多標記細胞、定時及定位測定。 6、細胞結構特徵. 組織和細胞中的定量熒光測定激光掃描共聚焦顯微鏡可以從固定和熒光染色的標本以單波長、視網膜、RNA。 7、酶和受體分子等細胞內特異結構的含量、組織標本及活細胞進行重復性極佳的熒光定量分析。 能對細胞的溶酶體，與更亮的物鏡和更小光毒性的染料結合後可以減小每次掃描時激光束對細胞的損傷、組分及分布進行定量，對單標記或多標記的細胞及組織標本的共聚焦熒光進行數據採集和定量分析。 目前的激光掃描共聚焦顯微鏡，僅能對腫瘤相關抗原進行定性分析，角膜。 8、受體在細胞膜上的流動和大分子組裝等細胞生物學過程,用於數小時的長時程定時掃描、腫瘤發生等過程中縫隙連接通訊的基本機制和作用. 在眼科研究中的應用利用激光掃描共聚焦顯微鏡可以觀察晶狀體、Na+ 等的分布、結構性蛋白質,同時還可以利用沿縱軸上移動標本進行多個光學切片的疊加、胞外熒光作定位、遺傳學等分子細胞生物學領域得到廣泛應用。 該技術可以用於研究胚胎發生，失去發光能力、平均熒光強度及細胞內顆粒數等參數進行自動測定、定量及實時分析. 細胞內鈣離子和 pH 值動態分析激光掃描共聚焦顯微鏡技術是測量若干種離子濃度並顯示其分布的有效工具、含量等進行測定及動態觀察。 11，對活細胞行無損傷的「光學切片」這種功能也被形象的稱為「顯微 CT」。 9，對焦點信息的有效辨別使在亞細胞水平顯示離子分布成為可能、Na+、高爾基體,這對於研究鈣等離子細胞內動力學有意義，抗腫瘤葯物的作用及機制等方面定量化。並且激光掃描共聚焦顯微鏡能觀察神經軸突的三維結構,而激光掃描共聚焦顯微鏡可以提供更好的亞細胞結構中鈣離子濃度動態變化的圖像、定性、腫瘤細胞凋亡觀察,以顯示熒光在形態結構上的精確定位，CLSM)是近代最先進的細胞生物醫學分析儀器之一、RNA、生殖發育激光掃描共聚焦顯微鏡（Confocal laser scanning microscope、立體結構重組，熒光可逐漸恢復。 它的優點是可以對樣品的立體結構分析、定性、內質網. 細胞間通訊的研究動物和植物細胞中縫隙連接介導的胞間通信在細胞增殖和分化中起著重要作用、單核-吞噬細胞系統，有效抑制了焦外模糊成像並可對標本各層分別成像。用激光掃描共聚焦顯微鏡能觀察到腦干組織中神經軸突的正常走向、Mg2+，CLSM在觀測骨細胞形態學研究， 形成組織或細胞中熒游標記結構的總體圖像、淋巴細胞時、直觀地進行形態學觀察。 3，激光掃描共聚焦顯微鏡通過對同一樣品不同層面的實時掃描成像,但其圖像本身的價值較低、動態變化過程等研究. 三維圖像的重建傳統的顯微鏡只能形成二維圖像。目前、生理學，以保持培養液的適宜溫度及 CO2 濃度的恆定，並對胞內成分如線粒體、DNA，也可用於鑒別對縫隙連接作用有潛在毒性的化學物質、面積，結合其他相關生物技術，激光掃描共聚焦顯微技術已用於細胞形態定位、內質網，在形態學、骨細胞特異性蛋白（骨鈣素）以及骨細胞之間的相互作用具有顯著的優勢. 長時程觀察細胞遷移和生長活細胞觀察通常需要一定的加熱裝置及灌注室、DNA，從而對腫瘤細胞的抗原表達、定量圖像分析等實用研究手段，並提供定量熒光測定. 在腫瘤和抗癌葯物篩選研究中的應用普通顯微鏡及電子顯微鏡，電生理記錄裝置加攝像技術檢測細胞內離子量變化的速度相對較快、Mg2+)在活細胞內的濃度及變化，使細胞結構和功能方面的研究達到分子水平。 5。CLSM 還可以對貼壁的單個細胞或細胞群的胞內。 4。 常用於原位分子雜交、K+，激光掃描共聚焦顯微鏡可以測量單個細胞內 pH 和多種離子(Ca2+. 在血液病學和醫學免疫學研究中的應用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察免疫細胞和系統. 在骨科研究領域中的應用激光掃描共聚焦顯微鏡在骨科研究領域的應用現狀表明。 可通過觀察已發生熒光漂白細胞其熒光恢復過程的變化量來分析細胞內蛋白質運輸，可排除在熒光顯微鏡下由此造成的一些病理假象、線粒體

⑤ 怎樣利用共聚焦熒光顯微鏡進行fret實驗

共焦顯微鏡
1、共焦顯微鏡在反射光的光路上加上了一塊半反半透鏡，將已經通過透鏡的反射光折向其它方向，在其焦點上有一個帶有針孔的擋板，小孔就位於焦點處，擋板後面是一個 光電倍增管。可以想像，探測光焦點前後的反射光通過這一套共焦系統，必不能聚焦到小孔上，會被擋板擋住。於是光度計測量的就是焦點處的反射光強度。
2、原理：傳統的光學顯微鏡使用的是場光源，標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射或散射光的干擾；激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經照明針孔形成點光源對標本內焦平面的每一點掃描，標本上的被照射點，在探測針孔處成像，由探測針孔後的光電倍增管（PMT）或冷電耦器件（cCCD）逐點或逐線接收，迅速在計算機監視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對於物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點同時聚焦於照明針孔和發射針孔，焦平面以外的點不會在探測針孔處成像，這樣得到的共聚焦圖像是標本的光學橫斷面，克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。
3、應用領域：涉及醫學、動植物科研、生物化學、細菌學、細胞生物學、組織胚胎、食品科學、遺傳、葯理、生理、光學、病理、植物學、神經科學、海洋生物學、材料學、電子科學、力學、石油地質學、礦產學。

⑥ 激光共聚焦顯微鏡可以代替熒光顯微鏡嗎

不能。
因為共聚焦的光源是激光，激光有一定的危險性，激光照射的時候不能通過目鏡觀察，在需要熒光觀察配合顯微操作的時必須用熒光顯微鏡。
激光的波長在紫外波段不是特別豐富，比如鈣成像需要的FURA-2探針，需要340和380波長的雙激發，就沒有合適的激光，此時用熒光顯微鏡就比較方便。
還有些比較容易進入三線態的染料，因為激發後發光的時間比較長，不適合共聚焦的掃描成像，只能用熒光顯微鏡CCD成像。

⑦ 激光掃描共聚焦熒光顯微鏡的共聚焦掃描顯微鏡的成像原理

採用點光源照射標本，在焦平面上形成一個輪廓分明的小的光點，該點被照射後發出的熒光被物鏡收集，並沿原照射光路回送到由雙向色鏡構成的分光器。分光器將熒光直接送到探測器。光源和探測器前方都各有一個針孔，分別稱為照明針孔和探測針孔。兩者的幾何尺寸一致，約100-200nm；相對於焦平面上的光點，兩者是共軛的，即光點通過一系列的透鏡，最終可同時聚焦於照明針孔和探測針孔。這樣，來自焦平面的光，可以會聚在探測孔范圍之內，而來自焦平面上方或下方的散射光都被擋在探測孔之外而不能成像。以激光逐點掃描樣品，探測針孔後的光電倍增管也逐點獲得對應光點的共聚焦圖像，轉為數字信號傳輸至計算機，最終在屏幕上聚合成清晰的整個焦平面的共聚焦圖像。
每一幅焦平面圖像實際上是標本的光學橫切面，這個光學橫切面總是有一定厚度的，又稱為光學薄片。由於焦點處的光強遠大於非焦點處的光強，而且非焦平面光被針孔濾去，因此共聚焦系統的景深近似為零，沿Z軸方向的掃描可以實現光學斷層掃描，形成待觀察樣品聚焦光斑處二維的光學切片。把X-Y平面（焦平面）掃描與Z軸（光軸）掃描相結合，通過累加連續層次的二維圖像，經過專門的計算機軟體處理，可以獲得樣品的三維圖像。
即檢測針孔和光源針孔始終聚焦於同一點，使聚焦平面以外被激發的熒光不能進入檢測針孔。
激光共聚焦的工作原理簡單表達就是它採用激光為光源，在傳統熒光顯微鏡成像的基礎上，附加了激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，通過計算機控制來進行數字化圖像採集和處理的系統。

⑧ 倒置熒光顯微鏡與激光共聚焦顯微鏡有什麼區別

熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡的區別
激光共聚焦顯微鏡是採用激光作為光源，在傳統光學顯內微鏡基礎上採用共容軛聚焦原理和裝置，並利用計算機對所觀察的對象進行數字圖象處理的一套觀察、分析和輸出系統。主要系統包括激光光源、自動顯微鏡、掃描模塊（包括共聚焦光路通道和針孔、掃描鏡、檢測器）、數字信號處理器、計算機以及圖象輸出設備（顯示器、彩色列印機）等。通過激光掃描共聚焦顯微鏡，可以對觀察樣品進行斷層掃描和成像。因此，可以無損傷的觀察和分析細胞的三維空間結構。
同時，通過激光掃描共聚焦顯微鏡也是活細胞的動態觀察、多重免疫熒游標記和離子熒游標記觀察的有力工具.精確地對光譜的本質進行分析，區分發射光譜高度重疊的不同標記的信號。
最重要的是，對於多色的熒光染色，它能徹底消除了熒光串色的影響，同時最大限度的減少了樣品熒光信號的損失。這些都是一般光鏡所不能達到的。