ta克隆怎麼排除協同感染

Ⅰ TA克隆的具體原理及方法求教。~~~~~

ta克隆方法（original
ta
cloning
kit）把pcr片斷與一個具有3-t突出的載體dna連接起來的方法。因為pcr反應中所適用的聚合酶具有末端轉移的活性，通常在3加上a。例如：taq聚合酶同時具有的末端連接酶的功能，pcr反應時在每條pcr擴增產物的3端自動添加一個3-a突出端。只有用經過特殊處理的具有3-t突出末端的dna片斷才能通過t/a配對進行連接。通過pcr的方法擴增目的基因片斷的過程中，由於往往不清楚目的基因的dna序列，獲得的目的片斷通常需要通過ta克隆的方法，重組到t-載體中，通過序列測定清楚dna序列。由於在pcr過程中，使用的dna聚合酶不同，往往分為2種情況：（1）使用不同的taq酶，在pcr擴增循環結束後，加上72℃
10分鍾一個過程，taq酶可以在擴增產物的3末端加上a，因此pcr產物回收純化後可以和t載體直接連接。（2）使用高保真的dna聚合酶，如pfu酶，由於其不能在擴增產物的3末端加上a，得到的dna序列為鈍端，因此，需要在回收純化後進行加a的過程，通常是以pcr回收產物為模板，加上一定量的普通taq酶和反應液，加入datp（或dntp），
72℃
10分鍾，然後將加a產物直接用於ta連接。

Ⅱ ta克隆的優缺點

一、缺點：

1、PCR產物的酶切和判斷比較困難。

2、另外酶切連接過程本身也相當地費時費力。

二、優點：

1、克隆PCR產物較簡便、快捷的方法。

2、不需使用含限制酶序列的引物，不需將 PCR 產物進行優化，不需把PCR產物做平端處理，不需在 PCR 擴增產物上加接頭，即可直接進行克隆。

(2)ta克隆怎麼排除協同感染擴展閱讀：

T-A克隆由於在PCR過程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分為2種情況：

1、使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由於其不能在擴增產物的3末端加上A，得到的DNA序列為鈍端，因此，需要在回收純化後進行加A的過程，通常是以PCR回收產物為模板，加上一定量的普通Taq酶和反應液，加入dATP（或dNTP）， 72℃ 10分鍾，然後將加A產物直接用於TA連接。

2、使用不同的Taq酶，在PCR擴增循環結束後，加上72℃ 10分鍾一個過程，Taq酶可以在擴增產物的3末端加上A，因此PCR產物回收純化後可以和T載體直接連接。