真菌去壁

A. 溶菌酶能用於真菌的脫壁嗎

沒有作用！
溶菌酶可以破壞細菌細胞壁的肽聚糖，而真菌細胞壁主要成分是幾丁質，所以溶菌酶對真菌無效

B. 真菌的細胞壁是什麼成分

真菌包括三類:1.單細胞真菌(酵母菌) 2.絲狀真菌(黴菌)3.大型子實體真菌(覃菌即食用菌）
酵母菌的細胞壁厚約25nm，結構似三明治——外層為甘露聚糖，內層為葡聚糖，中間為蛋白質分子。
對於黴菌在菌絲的頂端的延伸區和硬化區中，細胞的內層是幾丁質，外層為蛋白質；在亞頂端部位，由內至外分別為幾丁質層，蛋白質層，和葡聚糖蛋白網層；在成熟區由內至外相應地；為幾丁質層，蛋白質層，和葡聚糖蛋白網層；最後就是隔膜區，它由菌絲內壁向內延伸而成的環片狀構造。

C. 真菌細胞壁降解酶

真菌細胞壁由幾丁質、纖維素、葡聚糖、甘露聚糖等多糖、蛋白質和類脂構成，木黴菌可以產生大量這類物質的降解酶類，直接破壞植物病原真菌的細胞壁，導致細胞死亡。所有關於溶壁酶調控和表達的研究都是在不同碳源（如幾丁質、葡聚糖、GlcNAc、真菌細胞壁）條件下的液體培養基中進行的，在此條件下，誘導物能夠誘導木霉產生水解真菌細胞壁的溶壁酶。與生防相關的真菌細胞壁降解酶主要有幾丁質酶、纖維素酶、葡聚糖酶、蛋白酶等。

12.2.2.1 幾丁質酶

幾丁質酶在木霉重寄生病原菌過程中發揮重要的作用。Inbar等（1995）研究T.harzianum特異性幾丁質酶在其寄生白絹病菌過程中的活性。首先，T.harzianum的102kDa 1，4-β-N-乙醯葡聚糖胺酶（CHIT102）被誘導，隨著作用時間的推移，誘導量逐漸下降，隨後長約73kDa的1，4-β-N-乙醯葡聚糖胺酶（CHIT73）誘導量逐漸上升。但白絹病菌在與T.harzianum共同培養前經過高壓滅菌時，這種現象就不會出現，這說明引起這種現象的重要因素來自宿主。Hoell等（2005）研究指出，幾丁質酶 CHIT30 是從T.atroviride P1發酵液中分離純化得到的，屬於糖苷水解酶18 家族，最適 pH 為4.5～5.0，在降解β-幾丁質時，能產生大量的三聚體和四聚體，N-乙醯葡糖胺試驗顯示，有7個糖結合位點。

Harman等（1996b）利用雙重培養試驗，讓木霉分別拮抗R.solani和S.rolfsii，這兩種病原菌含有的幾丁質是細胞壁的主要組成成分。本研究雙重瓊脂培養中木黴菌種比R.solani生長快，但無法超過S.rolfsii的生長速度；在有效拮抗R.solani的寄生作用中檢測到三種內切幾丁質酶：52kDa（CHIT52），42kDa（CHIT42）和33 k Da（CHIT33），一種外切N-乙醯葡糖胺酶（CHIT102）。相反，在無效拮抗S.rolfsii的重寄生作用中，只有兩種外切 N-乙醯葡糖胺酶（CHIT102和CHIT73）的活性被檢測到。上述結果證實了T.harzianum的幾丁質酶系統並不是由簡單的「開/關」機制控制，並不僅僅相對幾丁質的出現和消失而做出反應（Lorito et al.，1993b，1994）。因此，認為T.harzianum幾丁質酶的這種不同表達影響了真菌拮抗特異性宿主的所有拮抗活性，從而決定了宿主活性。

Carsolio等（1994）在T.harzianum IMI206040與R.solani直接對峙分析中研究42kDa內切幾丁質酶（CHIT42）的表達模式，結果發現CHIT42在拮抗過程中受到強烈誘導表達；Lorito等（1996c）進一步研究發現，在幾丁質存在或光照情況下，內切幾丁質酶編碼基因Ech42進行表達；Cortes等（1998）和Zeilinger等（1999）研究證明，當T.harzianum與R.solani共培養，菌絲發生物理接觸前，編碼內切幾丁質酶基因Ech42和蛋白編碼基因Prb1均被誘導表達，且通過一個可溶性傳導因子——幾丁寡糖激發相關基因進行調控。與之形成鮮明對照的是R.solani僅在菌絲生長階段幾丁質酶Chit33被誘導產生（De las Mercedes et al.，2001），而T.asperellum中的幾丁質酶CHIT33，CHIT36等均在與寄主接觸前被誘導表達（Viterbo et al.，2002）；T.atroviride中的幾丁質酶基因Ech42在碳源缺乏的情況下通過一種BrlA類似的順式作用元件進行調控表達（Brunner et al.，2003）。Mach等（1999）研究發現 2個主要的幾丁質酶基因 Ech42和Nag1（編碼CHIT73）分別通過不同的信號分子調控表達。Zeilinger等（1999）通過原位表達幾丁質酶基因Ech42發現，Ech42在木霉與寄主接觸前和重寄生過程中均有表達，且通過可溶性幾丁寡糖激發。

12.2.2.2 纖維素酶

Zaldívar等（2001）報道一株T.aureoviride的突變株7-121 可以產生過量的胞外纖維素酶和β-葡萄糖苷酶（纖維二糖酶）。該突變株在液體和固體培養基中迅速生長，搖瓶培養時產生的內切葡聚糖酶、濾紙酶活和纖維二糖酶量比野生型菌株增加了2～4倍；纖維二糖酶的產量特別高（約5U/mL），適合降解廢棄物纖維素；此外還表現出增強的真菌細胞壁降解酶活性。以上均表明，它是一個可用於生物防治的候選菌株。Santos-Villalobos等（2013）也報道 T.asperellum T8 a 所產的纖維素酶可以降解芒果炭疽病菌（C.gloeosporioides）的菌絲體，通過篩選發現 17種木黴菌株對 C.gloeosporioides ATCC MYA456表現出至少67%的生長抑制，3種菌株具有完全抑製作用，確定T.asperellum T8 a在體外和體內都能夠抑制C.gloeosporioides ATCC MYA456和5種從瓦哈卡州芒果園分離的C.gloeosporioides菌株。

12.2.2.3 葡聚糖酶

Donzelli等指出，T.atroviride中的β-1，3-葡萄糖苷酶（1，3-β-glucosidase）編碼基因的表達被葡萄糖抑制，而被昆布多糖（laminarin）和其他葡聚糖所誘導（Donzelli et al.，2001）。而來自T.harzianum的外切a-1，3 葡聚糖酶（exo-alpha-1，3-glucanase）被真菌細胞壁和高壓蒸汽處理的菌絲所誘導產生（Ait-Lahsen et al.，2001）；a-1，3葡聚糖酶基因通過重寄生灰霉病菌而誘導表達（Sanz et al.，2005）。BGN16.3，一個來自T.harzianum的酸性β-1，6-葡聚糖酶被真菌細胞壁誘導產生，再次證明了水解酶作為生防作用機制的可能性（Montero et al.，2005）。Djonovic等（2006b）用同樣的方法證明了β-1，6-葡聚糖酶基因在T.viride重寄生和拮抗P.ultimum的過程中發揮了作用。

12.2.2.4 蛋白酶

Flores等（1996）利用基因缺失或過表達方法研究 T.harzianum 鹼性蛋白酶基因（pbrl）在T.harzianum和R.solani拮抗作用時的表達，發現重寄生過程中pbrl的mRNA水平增加。Olmedo-Monfil等（2002）指出，蛋白質編碼基因prb1受蛋白水解物抑制，而被R.solani細胞壁和滲透壓力誘導，其過表達能夠提高 T.harzianum 防治 R.solani的能力（Flores et al.，1997）。Tvsp1 基因是編碼 T.viride 體外分泌的絲氨酸蛋白酶基因，在T.viride對R.solani的拮抗作用試驗中，Pozo等（2004）通過絲氨酸蛋白酶TVSP1的缺失或過表達證實：該蛋白酶的缺失或過表達能夠顯著降低或提高棉花立枯病的防效，其缺失對生長和發育沒有不利影響，證明TVSP1在生防作用中扮演了重要角色。

D. 真菌是不是都有細胞壁

大多數真菌有細胞壁。

一 真菌的基本特徵

1 真菌的營養體

除少數單細胞真菌外，絕大多數真菌是由多細胞菌絲構成的。菌絲是纖細的管狀體，有的分隔，有的不分隔，組成一個菌體的全部菌絲稱菌絲體。

大多數真菌有細胞壁。某些低等真菌的細胞壁成分為纖維素，高等真菌細胞壁的主要成分為幾丁質。

E. 真菌到底有細胞壁嗎

真菌細胞的基本構造有細胞壁、細胞膜、細胞核、內質網、線粒體等。
真菌細胞壁的主要成分是多糖，另有少量的蛋白質和脂類。

F. 所有真菌都有細胞壁嗎

不是所有真菌都有細胞壁。真菌細胞壁是真菌特有的一種細胞結構。動物細胞不具有細胞壁，真菌細胞壁與植物細胞壁不同。

真菌細胞壁乾重的80%由碳水化合物組成，如：幾丁質、脫乙醯殼多糖、葡聚糖、纖維素、半乳聚糖等。大約10%由蛋白質及糖蛋白構成，蛋白質包括負責細胞壁生長的酶、特定胞外酶和將多糖交聯起來的結構蛋白。

此外，還有類脂、無機鹽等小分子。不同的多糖鏈相互纏繞組成粗壯的鏈，這些鏈構成的網路系統嵌入在蛋白質及類脂和一些小分子多糖的基質中，這一結構使真菌細胞壁具有良好的機械硬度和強度。

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真菌的形態多樣，一般分為單細胞和多細胞，酵母菌屬於單細胞，而黴菌和蕈菌（大型真菌）都屬於多細胞的真菌，它們歸屬於不同的亞門。大型真菌是指能形成肉質或膠質的子實體或菌核，大多數屬於擔子菌亞門，少數屬於子囊菌亞門。

常見的大型真菌有香菇、草菇、金針菇、雙孢蘑菇、平菇、木耳、銀耳、竹蓀、羊肚菌等。它們既是一類重要的菌類蔬菜，又是食品和制葯工業的重要資源。

真菌的細胞既不含葉綠體，也沒有質體，是典型異養生物。它們從動物、植物的活體、死體和它們的排泄物，以及斷枝、落葉和土壤腐殖質中、來吸收和分解其中的有機物，作為自己的營養。真菌的異養方式有寄生和腐生。

真菌常為絲狀和多細胞的有機體，其營養體除大型菌外，分化很小。高等大型菌有定型的子實體。除少數例外，真菌都有明顯的細胞壁，通常不能運動，以孢子的方式進行繁殖。

常見的真菌感染多為白色念珠菌、陰道纖毛菌、放線菌等。鹽水塗片中注意尋找真菌孢子、菌絲或纖毛菌叢。

G. 真菌細菌有無細胞壁

真菌：

真菌細菌都有細胞壁。

真菌細胞的基本構造有細胞壁、細胞膜、細胞核、內質網、線粒體等。

真菌細胞壁的主要成分是多糖，另有少量的蛋白質和脂類。

許多研究發現，不同的真菌，其細胞壁所含多糖的種類也不同，在低等真菌中，以纖維素為主，酵母菌以葡聚糖為主，而高等陸生真菌則以幾丁質為主。

細菌：

細菌基本結構是各種細菌都具有的結構，包括細菌的細胞壁、細胞膜、細胞質、核質。

細胞壁位於菌細胞的最外層，組成較復雜，主要成分是肽聚糖，並隨細菌不同而異。

革蘭陽性菌和革蘭陰性菌細胞壁的共有組分為肽聚糖，但各自有其特殊組分。

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一、真菌的結構

如果從形態上觀察各種真菌，可能有較大的差異，但是它們的細胞構造基本上是相同的。真菌細胞的基本構造有細胞壁、細胞膜、細胞核、內質網、線粒體等。

二、細菌的結構

細菌的結構分為基本結構和特殊結構。基本結構是各種細菌都具有的結構，包括細菌的細胞壁、細胞膜、細胞質、核質。某些細菌特有的結構稱為特殊結構，包括細菌的莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞。

三、細菌的種類

1、按形狀分為三類，球菌、桿菌和螺旋菌（包括弧菌、螺菌、螺桿菌）。

2、按細菌的生活方式分為兩大類，自養菌和異養菌，其中異養菌包括腐生菌和寄生菌。

3、按細菌對氧氣的需求可分為兩大類，需氧（完全需氧和微需氧）和厭氧（不完全厭氧、有氧耐受和完全厭氧）細菌。

4、按細菌生存溫度可分為三大類，喜冷、常溫和喜高溫。

H. 真菌細胞壁破碎方法

小的玻璃珠研磨破碎
消化細胞壁的酶，比如zymolyase.Invitrogen等biotech 公司都有賣的
www.zymoresearch.com/protocols/yeast/E1001&2n2-tox-5-25.pdf